真菌診断検査

菌類(菌類)は自然界に広く存在します。これまでに約 400,000 種が記載されていますが、そのうちヒトに感染を引き起こす可能性があるのは 100 ~ 150 種のみです。真菌によって引き起こされる病気は真菌症と呼ばれます。真菌および真菌疾患を研究する科学の分野は、真菌学と呼ばれます。

真菌は、真核生物の構造を持つ微生物です。葉緑素を持たないため光合成ができず、植物とは異なります。それらは通性嫌気性菌または偏性好気性菌です。真菌は異好性微生物であり、炭素およびエネルギー源として有機化合物を使用することを意味します。加水分解酵素を外部環境に放出することで食物を消化し、消化された栄養素を吸収によって細胞内に取り込みます。

一部のキノコは莢膜を持ち、多糖構造を持っています。莢膜多糖類は、グルクロノキシロマンナン、ガラクトキシロマンナン、マンノプロテインという少なくとも 3 つの異なるポリマーで構成されています。真菌では、細胞壁の 90% がキチン、グルカン、マンナン、キトサンなどの多糖類ポリマーで構成され、10% がタンパク質、糖タンパク質、脂質で構成されています。多糖類の種類と量はキノコの種類によって異なります。細胞壁は細胞にその形を与え、浸透圧衝撃から保護し、抗原性があり、いくつかの酵素を含むため生理活性を持っています。細胞膜は、哺乳類の膜と同様、リン脂質、タンパク質、ステロールから構成される二重層構造です。哺乳類の膜とは異なり、コレステロールの代わりにエルゴステロールとザイモステロールが含まれています。細胞膜の機能には、細胞質の保護、物質交換の調節、カプセルと壁の合成の補助などが含まれます。現在治療目的で使用されているほとんどの抗真菌グループの薬剤の標的部位は、膜にあるエルゴステロールです。

真菌の胞子は繁殖を担っています。生殖は、有性胞子(接合胞子、子嚢胞子、担子胞子)、無性胞子(胞子胞子、節胞子、厚膜胞子、巨大分生子、微分生子、胞子嚢胞子)、または傍性的に起こります。真菌の科学的分類は有性胞子に基づいています。それらの形態学的外観によると、酵母 (カンジダ、サッカロミセスなど) とカビ (子嚢菌、接合菌、不完全菌など) の 2 つに分けられます。

診断検査

多種多様な真菌の分離と同定は、培養ベースおよび非培養ベース (血清学的、分子) 方法を適用して実行されます。抗真菌治療を開始する前に、臨床サンプルを無菌条件下で収集し、ホルマリンには入れず、材料に最適な担体媒体を入れた滅菌容器に入れて研究室に配送する必要があります。

治療に長い時間がかかるため、培養結果を得るには、直接の顕微鏡評価が非常に重要です。研究室に送られた臨床サンプルはまず肉眼的に評価され、酵母またはカビの存在に関する初期情報は顕微鏡的評価で得られます。直接顕微鏡検査では、KOH は 10-20-30%、通常は 30% の割合で使用されます。皮膚や爪の削り取り、羽毛、髪の毛、羊毛、皮膚の断片など。収集した材料に KOH を加えてキチン層を溶解し、真菌の菌糸を露出させます。染色顕微鏡検査には、グラム染色、ラクトフェノールコットンブルー、カルコフルオルホワイト、墨汁、グロコット・ゴモリ・マタミン銀引き、ピロリン酸・シッフ(PAS)、ギムザ、ライト、メイソン・フォンタナなどの染料が使用されます。木材の光は、感染した表面上の菌類を探すためにも使用できます。酸化ニッケルフィルターを通過した紫外線A線です。この光の下では、一部の菌類は、淡黄色、緑色、黄色の蛍光、サンゴ色の蛍光などの色を発することで識別できます。

培養は、直接的な診断方法よりも特異的な診断方法です。顕微鏡検査。確定診断ができない場合や真菌の種類を判定する場合に適用されます。培養評価では、コロニーの形態とその結果生じる色素の色が優先されます。使用される培地は、採取された臨床サンプルによって異なります。培地は、一次分離目的と特定目的に分けられます。

一次分離目的;

- サバローブドウ糖寒天 (SDA) およびブレイン ハート インフュージョン寒天(BHI);腐生性および病原性真菌の一次分離に使用されます。非無菌環境から採取されたサンプルには、抗生物質を含む SDA および BHI が使用されます。室温および 37 °C で 1 ~ 4 週間で繁殖し、一般にオフホワイトまたはクリーム色で、柔らかい粘稠度を持ち、通常は酵母臭があり、臭いのあるコロニーを形成します。

-阻害剤カビ寒天および酵母エキスリン酸。 馬寒天。病原性真菌の一次分離。

特定の目的;

- トゥイーン 80 とトリパン ブルー (MUJ) を使用したトウモロコシ粉ゼリー。カンジダ・アルビカンスのクラミド胞子診断、

-綿種子形質転換寒天培地。 Blastomyces dermatitidis のカビ相から酵母相への形質転換、

-Czapek 寒天培地。アスペルギルス分離、

バードシード寒天 (Staib 寒天);クリプトコッカス ネオフォルマスの分離、

-CHROMagar Candida。酵素反応形成に基づくカンジダ種の分離

- 酵母発酵ブロス;酵母の発酵特性、

-酵母窒素寒天;酵母の炭水化物同化特性。

さらに、BACTEC および BacT/Alert メソッドは、血液培養中の真菌の検出を加速します。

細菌 - チューブテスト;このテストでは、細胞からの生殖管の形成が求められます。酵母様微生物の軽い懸濁液を 0.5 ~ 1.0 ml の滅菌血清中で作成し、37℃で 2 ~ 4 時間インキュベートします。混合物を 1 滴スライド上に置き、カバースリップで覆います。細胞から生殖管が形成されているかどうかを顕微鏡で調べます。この状況は C. albicans の特徴です。

血清または体液中の真菌抗原または代謝産物を検出する検査は、全身性真菌感染症の血清学的診断にとってより価値があります。抗体は、ラテックス凝集法 (LA)、ELISA、酵素免疫測定法 (EIA)、ラジオイムノアッセイ (RIA)、免疫電気泳動 (IE)、および免疫拡散 (ID) 法によって検出できます。これらの方法では、細胞構造内の抗原または代謝産物が分析されます。マンナン、D-アラビニトール、(1-3)-β-グルカン、多糖類グルコロキシロマンナン、ガラクトマンナン、エノラーゼを検出できます。

分子診断法の人気はますます高まっていますが、それらはあらゆる臨床における日常的な方法として応用されています。実験室は経済的理由によるものであり、標準化の欠如により一般的ではありません。核酸増幅およびハイブリダイゼーションプローブを使用したシグナル増幅法は、感染性真菌の検出および同定に使用されます。核酸増幅技術では、ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) または同様の方法が使用されます。真菌量は非常に低く、培養および血清学的診断はまだ利用できません。 不十分な段階ではPCRによる診断法の方がより有効であると言える。逆転写酵素 (RT) PCR は、標的 RNA を増幅することを目的としています。

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